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                          大鼠亞甲基四氫葉酸還原黴ELISA試劑盒說明
                          文章來源︰上海丹施生物科技有限公司   添加時間︰2018/9/7 8:53:58 點擊率︰1203

                          實驗原理︰

                              本試劑盒應用雙抗體夾姆 舛 甌局寫笫,10亞甲基四氫葉酸還原黴(MTHFR)水平。用純化的大鼠5,10亞甲基四氫葉酸還原黴(MTHFR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被?溝奈 字幸來渭尤,10亞甲基四氫葉酸還原黴(MTHFR),再與HRP標記的羊抗大鼠抗體結合,形成抗體-抗原-黴標抗體復合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP黴的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5,10亞甲基四氫葉酸還原黴(MTHFR)呈正相關。用黴標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠5,10亞甲基四氫葉酸還原黴(MTHFR)含量。

                          樣本處理及要求

                          1、血清︰室溫血液自荒0-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉澱,應再次離心。

                          2、血漿︰應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘後,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應該再次離心。

                          3、尿液︰用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

                          4、細胞培養上清︰檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。

                          5、組織標本︰切割標本後,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一荽觳猓 漵 潿潮贛謾/span>

                          6、標本采集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

                          7、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物黴的(HRP)活性。

                          注意事項︰

                          1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用,黴標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

                          2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

                          3、各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

                          4、請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。

                          5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                          6、底物請避光保存。

                          7、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以黴標儀讀數為準.

                          8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

                          9、本試劑不同批號組分不得混用。

                          計算︰

                          以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。                  

                          試劑盒性能︰

                          1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

                          2.批內與批間應分別小于9%和11%

                          檢測範圍︰                                             

                          50 U/L -1000 U/L                                 

                          1.試劑盒保存︰;2-8℃。

                          2.有效期︰6個月

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